产品货号:
BTN101102
中文名称:
改良Lowry法蛋白定量试剂盒
英文名称:
Modified Lowry Protein Assay Kit
产品规格:
1000次
发货周期:
1~3天
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Folin酚(福林酚)试剂(磷钼酸和磷钨酸混合物)跟蛋白质中含酚氨基酸(色氨酸和酪氨酸)发生颜色反应,可用于测定蛋白质浓度,但灵敏度较低。Lowry在此基础上加入Biuret(双缩脲)反应步骤,即先在碱性条件下使蛋白质和Cu+形成复合物,此复合物再使Folin酚试剂还原,发生显色反应,产物在500nm~750nm之间均可检测。Lowry法可以同时检测含芳香环基团氨基酸和肽键,故灵敏度是单独使用Folin酚的10倍左右,是双缩脲反应的200倍,因此成为早期检测蛋白浓度的主要方法。
Lowry法检测是基于还原反应,故极易受还原剂(DTT、巯基乙醇、半胱氨酸和谷胱甘肽等)、糖(果糖、蔗糖等)、含芳香环基团的氨基酸(酪氨酸和色氨酸)、甘油、钾离子、尿素、硫酸铵(铵离子具有还原性)、EDTA这些常见试剂的干扰,为此本公司对Lowry法进行改良。



- 即开即用,不需要单独购买每个成分再配制。
- 可以直接测定水溶性细胞成份和非水溶性细胞成份(如细胞膜系制备物,细胞膜蛋白,脂蛋白,酸沉淀物,冻干粉等)的蛋白含量。
- 能抵抗部分干扰物(如0.1M蔗糖、2.5mM EDTA、4M尿素和1%去污剂)的干扰。如需进一步去除还原剂等其他干扰物质,需要按附录方法处理。
- 检测线性范围广,在2~100μg,检测上限比经典Lowry法高30%~40%。
- 本试剂盒足够100次1mL体系的比色皿测定或400次0.25mL的微孔板测定。
- 本制品只能用于科研。

| 组分 | 规格 |
| 改良Lowry法溶液A | 75mL |
| 改良Lowry法溶液B | 1mL |
| 福林酚 | 50mL |
| BSA标准品(2mg/mL) | 1mL |
保存:室温,其中收到货后BSA标准品需置于-20℃,福林酚需置于4℃,有效期1年。

去离子水,蛋白样品,样品缓冲液。

一、比色皿测定法
- 制备标曲液:先用去离子水将BSA标准品2mg/mL稀释到50μg/mL,然后标记1~6个1.5mL离心管,分别加入200、175、150、100、50和0μL去离子水,然后再加入0、25、50、100、150和200μL浓度为50μg/mL的BSA溶液,震荡半分钟混匀。1~6号管中BSA的浓度分别为0、6.25、12.5、25.0、37.5和50.0μg/μL。
- 假设有N个待测样本,每个样本做一次重复,则再标记N个1.5mL的离心管,分别加入200μL待测样本。如果重复数不止一个,则标记的试管数需要相应的调整。
- 新鲜配制本次实验所需的两种溶液。根据每个样本需要600μL改良Lowry染色液的比例计算所需体积并按下列方法新鲜配制(以配制10mL为例):将10mL溶液A和0.1mL溶液B充分混匀即得改良Lowry染色液。根据每个样本需要60μL福林酚工作液的比例计算所需该液的体积并按下列方法新鲜配制(以配制10mL为例):将5mL福林酚和5mL去离子水充分混匀即得福林酚工作液。
- 每管中加600μL上步制备的改良Lowry染色液,振荡混匀后室温反应10~60分钟。
- 每管中加入60μL福林酚工作液,振荡混匀后室温反应45分钟。
- 用容量为1mL、光径为1cm的玻璃比色杯或聚苯乙烯比色杯测定750nm的光吸收(由于显色物质光谱比较广,也可以选择660nm),以下简称A值。测定时,先空白(即阴性对照)后样品,测定样品和BSA标准品时,先低浓度后高浓度。测定未知样品前需要将杯子清洗干净,必要时可以用甲醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。
- 以标曲样本的浓度为横轴,以其A值为纵轴,绘制标准曲线,得到线性回归方程式,然后代入待测样品的A值计算得到其对应的浓度。
二、96微孔板测定法
同上,只是反应用96微孔板设置,各成分用量减少4~5倍(反应体积从1mL减低到250~200μL),用酶标测试仪750nm测定光吸收。

样品中干扰物质的去除:
如果样品中有干扰Lowry法蛋白定量的其他物质,可用自备试剂按下法去除:用水将样品调到体积为250μL,加入25μL的0.15%去氧胆酸钠,混匀,室温放置10分钟。加入25μL的72%的TCA,室温放置5分钟。3000×g离心15分钟,小心去除上清。用200μL水溶解蛋白沉淀后以用于改良Lowry法测定。
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