产品货号:
BTN101102
中文名称:
改良Lowry法蛋白定量试剂盒
英文名称:
Enhanced Lowry Assay Kit
产品规格:
1000次
发货周期:
1~3天
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Folin酚试剂(磷钼酸和磷钨酸混合物)跟蛋白质中含酚氨基酸(色氨酸和酪氨酸)发生颜色反应,可用于测定蛋白质浓度,但灵敏度较低。Lowry在此基础上加入Biuret(双缩脲)反应步骤,即先在碱性条件下使蛋白质和Cu+形成复合物,再使其与Folin酚试剂发生显色反应,产物在750nm检测。Lowry法使不含酚的蛋白质也能被检测出来,灵敏度是单独使用Folin酚的10倍左右,是双缩脲反应的200倍,因此成为早期检测蛋白浓度的主要方法。
- 即开即用,不需要单独购买每个成分再配制。
- 能抵抗部分干扰物(如一定浓度SDS或其他去污剂)的干扰。
- 检测线性范围广,在2~100μg,检测上限比经典Lowry法高30%~40%。
成分 | 规格 |
溶液A成分一 | 208mL |
溶液A成分二 | 16mL |
溶液A成分三 | 16mL |
溶液B | 80mL |
溶液C | 80mL |
福林酚 | 10mL |
BSA标准品(2mg/mL) | 1mL |
说明书 | 1份 |
保存:RT,其中BSA标准品需要-20℃保存,有效期一年。
去离子水、蛋白样品、样品缓冲液
一、准备工作
- 制备溶液A:将16mL溶液A成分二和16mL溶液A成分三加入到装溶液A成分一的塑料瓶中,混合均匀得到240mL溶液A。注意:溶液A各成分分开提供更加稳定。
- 制备Lowry工作液:将溶液A、溶液B和溶液C按3:1:1的体积比混合得到Lowry工作液。此工作液可以室温放置2~3周,所以最好用多少配多少。如果发现溶液B或溶液C有沉淀,需37℃溶解并摇匀后再使用。
- 制备福林酚工作液:在装有10mL福林酚的棕色塑料瓶中加入90mL去离子水,摇晃混匀待用。此工作液在避光条件下可以放置6个月。
二、试管法
- 先用去离子水将BSA标准(2mg/mL)稀释到50μg/mL,然后在标记的试管中加入下列成分(单位:μL)。注意:每个样品最好做三个稀释度,每个稀释度最好设置三次重复,阴性对照和标准品也最好做三次重复。
标准品(每个做三次重复,此处只列出一个) 编号 BSA标准(50μg/mL) 水 总体积 阴性对照 0 0 200 1 0 200 200 2 25 175 200 3 50 150 200 4 100 100 200 5 150 50 200 6 200 0 200 样品(以1个样品、3个稀释度为例,每个稀释度三个重复,此处只列出一个) 编号 样品 总体积 1 200(稀释度1) 200 阴性对照1 200(用稀释度1稀释的溶解蛋白样品的缓冲液) 200 2 200(稀释度2) 200 阴性对照2 200(用稀释度2稀释的溶解蛋白样品的缓冲液) 200 3 200(稀释度3) 200 阴性对照3 200(用稀释度3稀释的溶解蛋白样品的缓冲液) 200 - 每管中加入200μL Lowry工作液,振荡混匀后室温反应10分钟。
- 每管中加入100μL福林酚工作液,振荡混匀后室温反应30分钟。
- 用容量为0.5mL、光径为1cm的玻璃比色杯或聚苯乙烯比色杯测定750nm的光吸收。测定时,先空白(即阴性对照)后样品,测定样品和BSA标准品时,先低浓度后高浓度。测定未知样品前需要将杯子清洗干净,必要时可以用甲醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。
- 根据标准品三个重复的平均值绘制标准曲线,然后根据未知样品的光吸收从标准曲线中查得其对应的浓度。
三、96微孔板法
- 同上,只是反应用96微孔板设置,用酶标测试仪750nm测定光吸收。
四、样品中干扰物质的去除
本制品不含相关产品,如果样品中有干扰Lowry法蛋白定量的物质(见附表),可另购本公司的微量蛋白质沉淀试剂盒(货号:BTN81217)去除,也可以用自备试剂按下法去除:用水将样品调到体积为200μL,加入20μL 0.15%去氧胆酸钠,混匀,室温放置10分钟。加入20μL 72%的TCA,室温放置5分钟。3000g离心15分钟,小心去除上清。用200μL水溶解蛋白沉淀后以用于Lowry法测定。
附:常见Lowry法蛋白定量干扰物(低于所列浓度不干扰,高于所列浓度则会干扰,需要按上法去除。不能含任何浓度的DTE,DTT和硫酸胺)。
干扰物 | 浓度 | 干扰物 | 浓度 |
Acetone | 10% | 2-Mercaptoethanol | 1mM |
Aprotinin | 10mg/mL | NaCl | 1M |
CHAPS | 0.05% | NaOH | 100mM |
DMF | 10% | NaPi | 100mM |
DMSO | 10% | NP40 | 0.02% |
EDTA | 1mM | PMSF | 1mM |
EGTA | 1mM | SDS | 1% |
Ethanol | 10% | Sodium Citrate | 100mM |
Glucose | 100mM | Sucrose | 7% |
Glycin | 100mM | Tris | 10mM |
HEPES | 1mM | Trition X-100 | 0.03% |
Imidazole | 25mM | Tween 20 | 0.05% |
Methanol | 10% | Urea | 3M |
- 该方法检测的蛋白质浓度范围1μg~50μg/mL。
- 由于Lowry法测定的是蛋白质中酪氨酸残基,对于那些酪氨酸残基数高于或低于BSA,其测定的蛋白质含量将偏低或偏高。如果遇到该情况,需要采用BCA或Bradford法测定。
- 阅读测定方法后化学试剂对测定方法的影响。
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