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改良Lowry法蛋白定量试剂盒图片
产品货号:
BTN101102
中文名称:
改良Lowry法蛋白定量试剂盒
英文名称:
Enhanced Lowry Assay Kit
产品规格:
1000次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

Folin酚试剂(磷钼酸和磷钨酸混合物)跟蛋白质中含酚氨基酸(色氨酸和酪氨酸)发生颜色反应,可用于测定蛋白质浓度,但灵敏度较低。Lowry在此基础上加入Biuret(双缩脲)反应步骤,即先在碱性条件下使蛋白质和Cu+形成复合物,再使其与Folin酚试剂发生显色反应,产物在750nm检测。Lowry法使不含酚的蛋白质也能被检测出来,灵敏度是单独使用Folin酚的10倍左右,是双缩脲反应的200倍,因此成为早期检测蛋白浓度的主要方法。




Lowry检测原理图


  • 即开即用,不需要单独购买每个成分再配制。
  • 能抵抗部分干扰物(如一定浓度SDS或其他去污剂)的干扰。
  • 检测线性范围广,在2~100μg,检测上限比经典Lowry法高30%~40%。



成分规格
溶液A成分一208mL
溶液A成分二16mL
溶液A成分三16mL
溶液B80mL
溶液C80mL
福林酚10mL
BSA标准品(2mg/mL)1mL
说明书1份

保存:RT,其中BSA标准品需要-20℃保存,有效期一年。


去离子水、蛋白样品、样品缓冲液


一、准备工作
  1. 制备溶液A:将16mL溶液A成分二和16mL溶液A成分三加入到装溶液A成分一的塑料瓶中,混合均匀得到240mL溶液A。注意:溶液A各成分分开提供更加稳定。
  2. 制备Lowry工作液:将溶液A、溶液B和溶液C按3:1:1的体积比混合得到Lowry工作液。此工作液可以室温放置2~3周,所以最好用多少配多少。如果发现溶液B或溶液C有沉淀,需37℃溶解并摇匀后再使用。
  3. 制备福林酚工作液:在装有10mL福林酚的棕色塑料瓶中加入90mL去离子水,摇晃混匀待用。此工作液在避光条件下可以放置6个月。


二、试管法
  1. 先用去离子水将BSA标准(2mg/mL)稀释到50μg/mL,然后在标记的试管中加入下列成分(单位:μL)。注意:每个样品最好做三个稀释度,每个稀释度最好设置三次重复,阴性对照和标准品也最好做三次重复。
    标准品(每个做三次重复,此处只列出一个)
    编号BSA标准(50μg/mL)总体积
    阴性对照00200
    10200200
    225175200
    350150200
    4100100200
    515050200
    62000200

    样品(以1个样品、3个稀释度为例,每个稀释度三个重复,此处只列出一个)
    编号样品总体积
    1200(稀释度1)200
    阴性对照1200(用稀释度1稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)200
    2200(稀释度2)200
    阴性对照2200(用稀释度2稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)200
    3200(稀释度3)200
    阴性对照3200(用稀释度3稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)200

  2. 每管中加入200μL Lowry工作液,振荡混匀后室温反应10分钟。
  3. 每管中加入100μL福林酚工作液,振荡混匀后室温反应30分钟。
  4. 用容量为0.5mL、光径为1cm的玻璃比色杯或聚苯乙烯比色杯测定750nm的光吸收。测定时,先空白(即阴性对照)后样品,测定样品和BSA标准品时,先低浓度后高浓度。测定未知样品前需要将杯子清洗干净,必要时可以用甲醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。
  5. 根据标准品三个重复的平均值绘制标准曲线,然后根据未知样品的光吸收从标准曲线中查得其对应的浓度。


三、96微孔板法
  1. 同上,只是反应用96微孔板设置,用酶标测试仪750nm测定光吸收。


四、样品中干扰物质的去除
本制品不含相关产品,如果样品中有干扰Lowry法蛋白定量的物质(见附表),可另购本公司的微量蛋白质沉淀试剂盒(货号:BTN81217)去除,也可以用自备试剂按下法去除:用水将样品调到体积为200μL,加入20μL 0.15%去氧胆酸钠,混匀,室温放置10分钟。加入20μL 72%的TCA,室温放置5分钟。3000g离心15分钟,小心去除上清。用200μL水溶解蛋白沉淀后以用于Lowry法测定。
附:常见Lowry法蛋白定量干扰物(低于所列浓度不干扰,高于所列浓度则会干扰,需要按上法去除。不能含任何浓度的DTE,DTT和硫酸胺)。
干扰物浓度干扰物浓度
Acetone10%2-Mercaptoethanol1mM
Aprotinin10mg/mLNaCl1M
CHAPS0.05%NaOH100mM
DMF10%NaPi100mM
DMSO10%NP400.02%
EDTA1mMPMSF1mM
EGTA1mMSDS1%
Ethanol10%Sodium Citrate100mM
Glucose100mMSucrose7%
Glycin100mMTris10mM
HEPES1mMTrition X-1000.03%
Imidazole25mMTween 200.05%
Methanol10%Urea3M



  • 该方法检测的蛋白质浓度范围1μg~50μg/mL。
  • 由于Lowry法测定的是蛋白质中酪氨酸残基,对于那些酪氨酸残基数高于或低于BSA,其测定的蛋白质含量将偏低或偏高。如果遇到该情况,需要采用BCA或Bradford法测定。
  • 阅读测定方法后化学试剂对测定方法的影响。

相关搜索:改良Lowry法蛋白定量试剂盒Enhanced Lowry Assay Kit
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