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Folin酚（福林酚）试剂（磷钼酸和磷钨酸混合物）跟蛋白质中含酚氨基酸（色氨酸和酪氨酸）发生颜色反应，可用于测定蛋白质浓度，但灵敏度较低。Lowry在此基础上加入Biuret（双缩脲）反应步骤，即先在碱性条件下使蛋白质和Cu⁺形成复合物，再使其与Folin酚试剂发生显色反应，产物在750nm检测。Lowry法使不含酚的蛋白质也能被检测出来，灵敏度是单独使用Folin酚的10倍左右，是双缩脲反应的200倍，因此成为早期检测蛋白浓度的主要方法。

• 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
  
• 能抵抗部分干扰物（如一定浓度SDS或其他去污剂）的干扰。
  
• 检测线性范围广，在2～100μg，检测上限比经典Lowry法高30%～40%。
  
• 本制品只能用于科研。

1. 制备溶液A：将16mL改良Lowry法蛋白定量溶液A2和16mL改良Lowry法蛋白定量溶液A3加入到装改良Lowry法蛋白定量溶液A1的塑料瓶中，混合均匀得到240mL改良Lowry法蛋白定量溶液溶液A。
   
2. 制备改良Lowry法蛋白定量工作液：将改良Lowry法蛋白定量溶液A、改良Lowry法蛋白定量溶液B和改良Lowry法蛋白定量溶液C按3∶1∶1的体积比混合得到改良Lowry法蛋白定量工作液。此工作液可以室温放置2～3周，所以最好用多少配多少。如果发现改良Lowry法蛋白定量溶液B或改良Lowry法蛋白定量溶液C有沉淀，需37℃溶解并摇匀后再使用。
   
3. 制备福林酚工作液：在装有10mL福林酚的棕色玻璃瓶中加入90mL去离子水，摇晃混匀待用。此工作液在避光条件下可以放置6个月。

4. 先用去离子水将2mg/mL的BSA标准品稀释到50μg/mL，然后在标记的试管中加入下列成分（单位：μL）。
   • 注每个样品最好做三个稀释度，每个稀释度最好设置三次重复，阴性对照和标准品也最好做三次重复。

   标准品(每个做三次重复，此处只列出一个)
   编号	BSA标准(50μg/mL)	水	总体积
   阴性对照	0	0	200
   1	0	200	200
   2	25	175	200
   3	50	150	200
   4	100	100	200
   5	150	50	200
   6	200	0	200

   
   

   样品(以1个样品、3个稀释度为例，每个稀释度三个重复，此处只列出一个)
   编号	样品	总体积
   1	200(稀释度1)	200
   阴性对照1	200(用稀释度1稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)	200
   2	200(稀释度2)	200
   阴性对照2	200(用稀释度2稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)	200
   3	200(稀释度3)	200
   阴性对照3	200(用稀释度3稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)	200

5. 每管中加入200μL改良Lowry法蛋白定量工作液，振荡混匀后室温反应10分钟。
   
6. 每管中加入100μL福林酚工作液，振荡混匀后室温反应30分钟。
   
7. 用容量为0.5mL、光径为1cm的玻璃比色杯或聚苯乙烯比色杯测定750nm的光吸收。测定时，先空白（即阴性对照）后样品，测定样品和BSA标准品时，先低浓度后高浓度。测定未知样品前需要将杯子清洗干净，必要时可以用甲醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。
   
8. 根据标准品三个重复的平均值绘制标准曲线，然后根据未知样品的光吸收从标准曲线中查得其对应的浓度。

9. 同上，只是反应用96微孔板设置，用酶标测试仪750nm测定光吸收。

10. 如果样品中有干扰Lowry法蛋白定量的物质，可用自备试剂按下法去除：用水将样品调到体积为200μL，加入20μL的0.15%去氧胆酸钠，混匀，室温放置10分钟。加入20μL的72%的TCA，室温放置5分钟。3000×g离心15分钟，小心去除上清。用200μL水溶解蛋白沉淀后以用于Lowry法测定。